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TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒-FITC(100T)

In Situ Cell Apoptosis Detection Kit (FITC)

MK1027

5600元/100T  

細胞凋亡檢測

TUNEL法細胞凋亡檢測試劑盒

現貨

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Product Brief

  • 產品概況

    產品貨號MK1027
    產品名稱TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒-FITC(100T)
    價格規格

    ¥5600/盒(100T)

    保存條件-20℃冷凍保存,一年有效。
    工作原理在機體內部隨時都在發生著細胞的死亡。傳統上用顯微鏡來觀察細胞的死亡,其特征為核染色質的濃縮及碎片的形成。但是這種現象出現的很晚,時間也很短暫。凋亡的特征是內源性核酸內切酶被激活,細胞自身的染色質或DNA被切割,出現單鏈或雙鏈缺口,并產生與DNA斷點數目相同的3’-OH末端。末端脫氧核糖核酸轉移酶(Terminal deoxynucleotidyl Transferase )可以將地高辛標記的dUTP (DIG-dUTP)標記至3’-OH末端,DIG-dUTP結合在DNA斷點部位,可以通過生物標記的抗地高辛抗體(Anti-DIG-Biotin)反應后,再結合鏈酶親和素-熒光素FITC(SABC-FITC)。FITC在490-495nm激化,在520-530nm發射熒光,呈黃綠色。凋亡的細胞核呈黃綠色,從而可以在顯微鏡下觀察到著色的凋亡細胞。
    試劑盒內容1. 標記緩沖液(Labeling Buffer)          5ml
    2. 末端脫氧核糖核酸轉移酶(TdT,×20) 100μι
    3. DIG-dUTP (×20)                            100μι
    4. 封閉液(Blocking Reagent)              20ml
    5. 生物素化抗地高辛抗體(× 100)         100μι
    6. SABC-FITC(×100)                           100μι
    7. Proteinase K (×200)                       250μι
    8. 抗體稀釋液                                      20ml
    9. 陽性對照片                                      2 張


Instructions

用戶自備試劑

1. 多聚賴氨酸或APES(博士德公司有售)。

2. 0.01M TBS,PH7.5(配法:1L雙蒸餾水中加入8.5克氯化鈉,1.2克Tris 和0.45—0.5ml純乙酸。)

3. DAPI染色液(貨號AR1176,AR1177)

4. 水溶性封片劑或抗熒光衰減封片劑。


操作步驟

1. 樣品處理

(1) 玻片預先用多聚賴氨酸或APES進行處理。

(2) 細胞涂片和冰凍切片:最重要的是及時固定。用4%多聚甲醛/0.01M PBS(PH7.0---7.6)室溫下固定30—60分鐘。0.01M PBS洗2分鐘×2次。蒸餾水洗滌2分鐘×2次。

(3) 組織:有條件時應及時固定。常規4%多聚甲醛/0.01M PBS(PH7.0---7.6)或10%中性緩沖福爾馬林固定4小時以上,石蠟包埋。切片常規脫蠟入水(脫蠟務必干凈)。

2. 標本片加0.01M TBS 1:200新鮮稀釋Proteinase K 37℃消化1—15分鐘,0.01M TBS洗2分鐘×3次。(細胞涂片和冰凍切片一般不消化或消化10—60秒鐘。新鮮石蠟切片消化5-10分鐘。陳舊石蠟切片消化10-15分鐘)。

3. 標本片加標記緩沖液(Labeling Buffer) 20μι/片,以保持切片濕潤。按每張切片取TdT和DIG-d-UTP各1μι,加入18μι標記緩沖液中,混勻。甩去切片上多余液體后加標記液,20μι/片。置樣品于濕盒中,37℃標記2小時。

4. 0.01M TBS洗2分鐘×3次。

5. 加封閉液50μι/片,室溫30分鐘,甩掉封閉液,不洗。

6. 用抗體稀釋液1:100稀釋生物素化抗地高辛抗體:(取1ml抗體稀釋液加生物素化抗地高辛抗體10μι),混勻后50μι/片加至標本片上。置樣品于濕盒中,37℃反應30分鐘。0.01M TBS洗2分鐘×3次。

7. 用抗體稀釋液1:100稀釋SABC:取1ml抗體稀釋液加SABC 10μι,混勻后50μι/片加至切片。37℃反應30分鐘。0.01M TBS洗5分鐘×4次。

8. 必要時可用DAPI染色液(貨號AR1176,AR1177)輕度復染,蒸餾水洗??篃晒馑p封片劑封片(可用甘油代替)。熒光顯微鏡觀察。

 

結果判定

細胞核中有黃綠色顆粒者為陽性細胞,即凋亡的細胞。

 

注意事項

1. 試劑盒嚴格-20℃存放。

2. 初用時如試管底部無可見的試劑,在離心機離心5分鐘,使試劑沉至管底。

3. 檢測過程中切勿使樣品干涸。

 

 

 


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