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TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒-CY3(100T)

TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒-CY3(100T)

MK1026

5600元/100T  

細胞凋亡檢測

TUNEL法細胞凋亡檢測試劑盒

現貨

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Product Brief

  • 產品概況

    產品貨號MK1026
    產品名稱TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒-CY3(100T)
    價格規格¥5600/盒(100T)
    保存條件-20℃冷凍保存,一年有效。
    工作原理在機體內部隨時都在發生著細胞的死亡。傳統上用顯微鏡來觀察細胞的死亡,其特征為核染色質的濃縮及碎片的形成。但是這種現象出現的很晚,時間也很短暫。凋亡的特征是內源性核酸內切酶被激活,細胞自身的染色質或DNA被切割,出現單鏈或雙鏈缺口,并產生與DNA斷點數目相同的3’-OH末端。末端脫氧核糖核酸轉移酶(Terminal deoxynucleotidyl Transferase )可以將地高辛標記的dUTP(DIG-dUTP)標記至3’-OH末端,DIG-dUTP結合在DNA斷點部位,可以通過生物標記的抗地高辛抗體(Anti-DIG-Biotin)反應后,再結合鏈酶親和素-熒光素CY3(SABC-CY3)。Cy3 在554nm 激化,在568-574nm 發射熒光,呈鮮紅色,從而可以在顯微鏡下觀察到著色的凋亡細胞。
    試劑盒內容1. 標記緩沖液(Labeling Buffer) 5ml
    2. 末端脫氧核糖核酸轉移酶(TdT,×20) 100μι
    3. DIG-dUTP (×20) 100μι
    4. 封閉液(Blocking Reagent) 20ml
    5. 生物素化抗地高辛抗體(× 100) 100μι
    6. SABC-CY3(×100) 100μι
    7. Proteinase K (×200) 250μι
    8. 抗體稀釋液20ml
    9. 陽性對照片2 張


Instructions

用戶自備試劑

1. 多聚賴氨酸或APES(博士德公司有售)。
2. 0.01M TBS,pH7.5 (配法:1L 雙蒸餾水中加入8.5 克氯化鈉,1.2 克Tris 和0.45—0.5ml 純乙酸)。
3. 水溶性封片劑或熒光衰減封片劑(博士德公司有售)。
4. DAPI染色液(貨號AR1176,AR1177)。

操作步驟

1. 樣品處理
(1) 玻片預先用多聚賴氨酸或APES 進行處理。
(2) 細胞涂片和冰凍切片:最重要的是及時固定。用4%多聚甲醛/0.01M PBS(PH7.0—7.6)室溫下固定30—60 分鐘。0.01M PBS 洗2 分鐘×2 次。蒸餾水洗滌2 分鐘×2 次。
(3) 組織:有條件時應及時固定。常規4%多聚甲醛/0.01M PBS (pH7.0—7.6)或10%中性緩沖福爾馬林固定4 小時以上,石蠟包埋。切片常規脫蠟入水(脫蠟務必干凈)。
2. 標本片加0.01M TBS 1:200 新鮮稀釋Proteinase K 37℃消化1—15 分鐘,0.01M TBS 洗2 分鐘×3次。(細胞涂片和冰凍切片一般不消化或消化10—60 秒鐘。新鮮石蠟切片消化5-10 分鐘。陳舊石蠟切片消化10-15 分鐘)。
3. 標本片加標記緩沖液(Labeling Buffer) 20μι/片,以保持切片濕潤。按每張切片取TdT和DIG-d-UTP 各1μι,加入18μι標記緩沖液中,混勻。甩去切片上多余液體后加標記液,20μι/片。置樣品于濕盒中,37℃標記2 小時。
4. 0.01M TBS 洗2 分鐘×3 次。
5. 加封閉液50μι/片,室溫30 分鐘,甩掉封閉液,不洗。
6. 用抗體稀釋液1:100稀釋生物素化抗地高辛抗體:(取1ml 抗體稀釋液加生物素化抗地高辛抗體10μι),混勻后50μι/片加至標本片上。置樣品于濕盒中,37℃反應30 分鐘。0.01M TBS洗2 分鐘×3 次。
7. 用抗體稀釋液1:100稀釋SABC-FITC:取1ml 抗體稀釋液加SABC 10μι,混勻后50μι/片加至切片。37℃反應30 分鐘。0.01M TBS 洗5 分鐘×4 次。
8. 必要時可用DAPI染色液(貨號AR1176或AR1177)輕度復染,蒸餾水洗??篃晒馑p封片劑封片。熒光顯微鏡觀察。

結果判定

細胞核中有鮮紅色熒光顆粒為陽性細胞,即凋亡的細胞。

注意事項

1. 試劑盒嚴格-20℃存放。
2.初用時如試管底部無可見的試劑,在離心機離心5 分鐘,使試劑沉至管底。
3.檢測過程中切勿使樣品干涸。


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